液相色谱仪的常见检测因素及解决方法

　　高效液相色谱仪作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。
　　1.气泡
　　但时常HPLC导液管中会有气泡存在，这会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降；气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏。造成影响上述问题现象的主要分析原因有三条：一是企业流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了一个空气而形成气泡；二是管理系统设计开始进行工作时未能将流路中的空气驱赶干净；三是在注入样品时不注意混入了中国空气。
　　为了避免这类问题的出现，HPLC实际分析过程中必须重视对流动相进行脱气处理；在HPLC系统开始工作前，可以用注射器连接恒流泵的排空阀，抽入流动相，将流路中的空气驱赶干净；在注入样品前注意排出样品注射器中的空气。
　　2.柱温
　　在操作HPLC时，色谱柱是在室温环境下工作的。大多数工作环境的温度是不断变化的，温差会引起更复杂的问题。温度的影响在所有的色谱分析方式中都是存在的，本文就来讨论液相色谱方法中的梯度洗脱方式受温度影响的问题。
　　等度洗脱时温度会影响保留时间，当温度升高时所有的色谱峰都前移了，等度洗脱时一般温度每升高１℃，保留时间会缩短（1~3）％。温度变化对梯度洗脱和等度洗脱的影响趋势相同。温度环境变化对梯度进行洗脱的影响要小于一个对等度洗脱的影响。即使如此，如果梯度洗脱不控制温度，保留值一般会有较大的变化。温度变化也可能导致选择性的显著变化。
　　正如柱不平衡导致保留时间重现性差，柱温不平衡导致不良后果，尤其是峰宽。当温度的变化加上选择性和保留时间的变化，峰宽也会发生变化。升高温度通常会使学生理论塔板数升高，峰宽变窄，由于峰面积不变，峰越窄就会越来越高，因此不断升高温度变化可以通过达到一个更小的检测限。
　　柱子里的温度变化也会影响峰形。当柱与流动相之间的温差增大时，由于温度不平衡引起的峰值变形加剧。

　　为了得到一致的结果，我们必须控制塔温，使用塔温箱是一种较好的方法。如果没有柱温箱，比较有效的办法是将色谱柱隔离在温度波动小的地方。